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生物药表征——排阻色谱法纯度测定

生物药表征——排阻色谱法纯度测定

  • 所属分类:生物药表征
  • 浏览次数:
  • 发布日期:2022-04-12 11:00:23
  • 产品概述
  • 案例解析

排阻色谱法(Size Exclusion ChromatographySEC)又称尺寸排阻色谱法、分子排阻色谱法、凝胶排阻色谱法、空间排阻色谱法,是液相色谱的一种主要分离模式。主要用于分离大分子,从而实现高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试,还可分离油溶性和水溶性物质。目前,SEC技术正被越来越多的应用于天然聚合物、合成聚合物和蛋白质的分离与表征,生物药的纯度是生产质控的重要指标之一。




仪器构造

HPLC-SEC系统主要由溶剂输送系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统组成。操作简便快捷、数据可靠且重现性好,自动化程度较高。


排阻色谱的色谱柱填料是凝胶,凝胶表面有不同尺寸的多孔网状结构,小分子物质进入色谱柱时由于扩散作用进入凝胶内部被滞留,大分子物质通过时被排阻在凝胶颗粒外面,在颗粒间迅速通过,从而实现分子筛效应,将混合物按照分子量大小分开。分子量越小离开色谱柱的时间越长,依据色谱峰是否单一来判断样本的纯度。



结果展示


色谱图-数据采集系统将检测器响应为色谱图中保留时间的函数,对色谱图下的峰进行积分确定峰面积,该峰面积与样本中组分存在浓度成正比。使用较高效液相进行纯度分析。依据色谱峰的保留值进行定性分析;根据色谱峰的峰面积或者峰高进行定量分析;根据色谱峰的单一性来判断样本的纯度。


送样标准


蛋白质样品可以是干粉、溶液;蛋白纯度>95%;蛋白质量>500 μg,浓度0.5μg/μL以上


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