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生物药表征——序列覆盖度

生物药表征——序列覆盖度

  • 所属分类:生物药表征
  • 浏览次数:
  • 发布日期:2022-04-12 11:05:04
  • 产品概述
  • 案例解析
序列覆盖度是用于评估肽谱的指标之一,对于蛋白质类药物的一级氨基酸序列的确证,保证蛋白质类药物的良好结构形成及维持蛋白质类药物性质均具有很重要的意义。目前,对蛋白质肽段覆盖率的检测根据药物申报要求的规定,均采用质谱法进行检测。


蛋白样品序列分析过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切,鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的序列信息,会选用在蛋白序列分析过程中常用的多种蛋白酶(TrypsinChymotrypsinGlu-C)分别对靶蛋白进行酶切和质谱测定,在得到碎裂肽段片段的同时,经过肽段之间的拼接完成蛋白序列的测定。




实验仪器


Q Exactive HF-X 质谱仪



技术原理与方法


蛋白质样品用多种蛋白酶酶解后,采用nanoLC-MS/MS检测,原始文件通过软件搜索理论序列库,得出检索到的肽段占全序列的百分比,即覆盖率(coverage)。



结果展示


按照下图所示的方式给出肽段覆盖率的数据。



样本需求


  • 胶内样品和溶液样品均可以用来进行上述测序;

  • 样品浓度及纯度:95%以上纯度单一蛋白;蛋白量需200μg以上


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