蛋白质组学

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生物药表征
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生物药表征——N/C端测序

生物药表征——N/C端测序

  • 所属分类:生物药表征
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  • 发布日期:2022-04-12 11:08:28
  • 产品概述
  • 案例解析
蛋白合成起始于N端,蛋白质N端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着影响力。例如N端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关。对蛋白进行N端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的结构,了解蛋白质的生物学功能。


C端序列是蛋白质和多肽的重要结构与功能部位,对蛋白质的生物功能起作用。此外,由于蛋白翻译后在细胞内需要进一步剪切和修饰,通常不能简单的使用基因序列对C端或N端做简单的预测,对于蛋白生物制品来说,使用C端测序是可行的,随着蛋白质组学研究的不断深入,蛋白质C端测序对其功能研究将发挥作用。一些新的蛋白质C端测序方法已建立,提高了灵敏度和重复性,能够在蛋白质组水平应用。
蛋白质和多肽N端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,尽管Edman法技术已应用较多,但仍有不尽人意之处,例如Edman降解法不能解决N端封闭的测序问题(环化、封闭)、被修饰的蛋白不能给出确切的信号,要求蛋白或多肽的纯度在95%以上,灵敏度较低。
以质谱为基础的N/C端测序技术可以实现对N端封闭和PEG化蛋白的序列测定,有效弥补了Edman测序的不足,形成互补。该技术可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂,重组蛋白N端和C端序列是否发生修饰。对于蛋白质(多肽)N端序列的分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。并且随着现代医药工业的发展,出现了大量的蛋白质和多肽类药物分子,对这些蛋白质多肽类药物分子N端序列的分析确认也是医药工业质量控制的重要环节。




实验仪器


Q Exactive HF-X 质谱仪



技术原理与方法

送检样本经还原烷基化后再经酶切,采用nanoLC-MS/MS检测,原始文件通过软件搜索理论序列库比对,确证N末端和C末端的肽段。




结果展示


样本经酶解,再经nanoLC-MS/MS检测,N端肽段被鉴定为(填写10个氨基酸);C末端肽段被鉴定为(填写10个氨基酸);与理论序列一致。



样本要求

样品浓度及纯度:蛋白质样品可以是干粉、溶液;95%以上纯度单一蛋白;蛋白量需200μg以上。


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