分子间互作尤其是蛋白-蛋白互作（PPI）始终是深入探究细胞信号通路的重难点。

利用LC-MS/MS蛋白鉴定技术对IP、co-IP、pull-down等纯化溶液样本进行蛋白鉴定，得到与目标蛋白相互作用的一系列蛋白质再通过后续检测方法验证目标蛋白的互作蛋白是目前行之有效的策略之一。

co-IP-MS案例解析

MGMT激活DUB3可稳定MCL1并促进卵巢癌化学耐药

MGMT-activated DUB3 stabilizes MCL1 and drives chemoresistance in ovarian cancer

研究对象：卵巢癌期刊：PNAS

影响因子：9.412发表单位：中国医学科学院分子肿瘤学国家重点实验室

研究背景

泛素化，这是一主要负责调节修饰蛋白稳定性和活性的翻译后修饰，参与几乎所有生物过程的调控， 并与肿瘤的发生和发展有关。相反，去泛素化酶(DUBs)可以从底物蛋白中切割泛素，编辑泛素链，并处理泛素前体以抵消泛素化过程。

BCL-2家族编码20多种蛋白质，包括调节内在凋亡途径的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，维持细胞存活和细胞死亡之间的平衡。MCL1由于其半衰期短，不同于其他BCL-2家族成员，调控细胞存活或凋亡状态转变应对各种应激。在卵巢癌中USP9X和USP1 3在泛素化实验中均不能完全裂解MCL1上的泛素链，提示可能存在其他对M CL1去泛素化必不可少的去泛素化酶。青莲百奥完成了验证去泛素化酶3(DUB3)与卵巢癌细胞的细胞质中的MCL1相互作用IP-MS实验中的质谱鉴定工作。

结果速递：

1.研究人员利用文库筛选的方法，在人胚胎肾细胞中探究66 个去泛素化酶对MCL1 的调控作用。最终发现，DUB3 能够显着上调MCL1 蛋白水平，是稳定MCL1 的最主要的去泛素酶。在9 株卵巢癌细胞系中，DUB3 与MCL1 的表达水平也有显着的相关性。

2.为了解决临床问题，研究人员想要找到一种合适的抑制剂。在分别实验了30 多种目前已被临床证明有效的抑制剂对DUB3 的调控作用后，他们发现，Patrin-2 对DUB3 的高表达有抑制作用。而Patrin-2 已被证实是甲基转移酶MGMT 的抑制剂。

Patrin-2抑制DUB3的表达

3. 过 表 达 MGMT 能 够 显 着 提 高 DUB3 的 mRNA水平， 同时经过9株卵巢癌细胞系实验验证，也发现MGMT的蛋白水平和DUB3的mRNA水平存在明显的正相关关系， 这说明MGMT转录激6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）是DUB3转录的关键激活因子，并且MGMT抑制剂PaTrin-2在体外和体内均有效抑制具有升高的MGMT-DUB3-MCL1表达的卵巢癌细胞； 组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACis）可以显著激活MGMT / DUB3的表达;HDACis和PaTrin-2的联合小鼠给药取得理想的治疗效果。最终揭示了MGMT-DUB3-MCL1轴在卵巢癌化疗耐药中的重要作用，并提供了一种克服卵巢癌化疗耐药的有效治疗方法：HDACis和PaTrin-2联合治疗。

MGMT转录激活DUB3

参考文献

Xiaowei Wu, Qingyu Luo, et al. MGMT-activated DUB3 stabilizes MCL1 and drives chemoresistance in ovarian cancer.PNAS. 2019;doi:10.1073/pnas.1814742116.