4. WB的原理是什么？

答案：Western Blot采用的是聚丙烯酰胺疑胶电泳，待检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离，转移到固相载体，例如硝酸纤维素薄膜（NC）上。固相载体可以吸附蛋白质，并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹（blot）。用蛋白溶液（如5%BSA）处理，封闭NC膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体（一抗）处理NC膜（只有待研究的蛋白质才能与ー抗特异结合形成抗原抗体复合物），这样清洗除去未结合的一抗后，只有在目标蛋白的位置上结合着一抗。用一抗处理过的NC膜再用标记的二抗处理（二抗是指一抗的抗体），处理后，带有标记的形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。

5. IP、co-IP、pulldown的区别是什么？

答案：IP（免疫沉淀）：是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。

co-IP（免疫共沉淀）：可对两种已知蛋白是否存在相互作用进行验证，也可以验证在总蛋白中是否含有与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

Pulldown：带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获，形成“次级亲和支持物”，用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。可用来证明两种已知蛋白间存在的相互作用或寻找与已知蛋白直接发生相互作用的未知分子。