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「青莲聚焦」精准药物表征,助力新药研发!生物药表征系列六跑新学期

2021-09-09 00:00:00


01
DSC测定

差示扫描量热法(DSC)是一种用于直接测定蛋白或其他生物分子在天然分子状态下的热稳定性的技术。该技术通过测量与分子恒速加热时的热量变化而实现对蛋白分子的热稳定性进行表征。
 DSC用来做药物与辅料的相互作用研究是很经典的应用。判断是否有相互影响,主要是看药物的特征吸热或放热峰是否消失或峰形,出现的温度是否有改变,另外如果出现新的峰也可以认为是药物与辅料有相互作用的证据。


实验仪器

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Malvern VP-capillary DSC


实验原理及检验方法

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蛋白分子在热跃迁中点(Tm)值对应的温度条件下,其折叠构象会发生突变,从而引起分子吸收或释放热量的变化。Tm值高,则代表较高的温度条件才能引起蛋白分子的折叠构象变化,说明该蛋白分子越稳定。利用Malvern VP-capillary DSC,设定扫描温度区间30℃100 °C,扫描速度为1°C/min,对一批参考品和三批次QC1中试生产成品和三批次QW的热稳定性进行检测,比较各个样品间的检测谱图和Tm值。


结果展示

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1 QC1 DSC检测谱图


1 DSC检测结果


样品标准

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样品浓度及纯度:总质量500μg以上,浓度1mg/ml以上,纯度95%以上



02
圆二色谱

圆二色谱(Circular Dichroism)又称CD光谱,是一种测量物质圆二色性的光谱技术,通过测量蛋白质等生物大分子的圆二色谱,从而得到生物大分子的二级结构,简单、快速、广泛的应用在蛋白质折叠、蛋白质构象研究和酶动力学等领域。

技术原理

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利用蛋白质的圆二色性及不对称分子对左右圆偏振光吸收的不同来进行结构分析。蛋白质或多肽中主要的光活性基团是肽键、芳香氨基酸残基及二硫键等,当平面圆偏振光的吸收不相同时,会产生吸收差值。由于这种吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圆偏振光变成了椭圆偏振光,即蛋白质的圆二色性α-螺旋的谱是双负峰形的,β-折叠是单负峰形的,无规卷曲在波长很短的地方出单峰。蛋白质的圆二色谱是它们所含各种立体结构组分的圆二色谱的代数加和曲线。因此用一波长范围的圆二色谱可研究蛋白质中各种立体结构的含量。

圆二色谱紫外区段(190-240nm),一般蛋白质的圆二色光谱分为两段,波长范围在185-245nm称为远紫外区,245-320nm称为近紫外区。具有不同二级结构的蛋白质或者多肽所产生的CD谱带的位置和吸收的强弱都不相同。可以利用不同区域的CD光谱推算蛋白质分子中的α-螺旋、β-折叠、β转角以及无规卷曲的含量。


案例分享

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1测试样本圆二色谱图


测试样本级结构比例表


送样标准

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总质量500μg以上,浓度1mg/ml以上,纯度95%以上。




生物药系列

生物药表征系列一

高分辨质谱法(EMR)分子量检测方法

等电点

生物药表征系列二

排阻色谱法纯度测定

SDS-PAGE

CE-SDS

生物药表征系列三

N/C端测序

序列覆盖度

生物药表征系列四

肽指纹图谱

氨基酸组成

生物药表征系列五

二硫键

质谱法HCP覆盖度

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