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「青莲聚焦」历“九”弥新—外泌体一站式解决方案

2021-08-05 00:00:00



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近年来,针对外泌体的研究越来越多,外泌体应用领域大致可分为以下几种:1.作为癌症的诊断和预后标志物;2.可作为药物运输系统;3.携带抗原的肿瘤免疫疗法等。
越来越多的证据支持放射治疗在诱导抗肿瘤免疫中的重要性。小细胞外囊泡(sEVs) 在肿瘤抗原的加载和传递中起重要作用。然而,sEVs 在辐射诱导的抗肿瘤免疫中的作用仍不清楚。 因此,确定sEVs在辐射诱导免疫中的作用和调节机制非常重要。
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2020年,福建医科大学附属肿瘤医院邱素芳老师课题组在发表了题为Radiation-induced small extracellular vesicles as“carriages” promote tumor antigen release and triggerantitumor immunity的研究论文。该研究通过LFQ蛋白质组学的方法对不同辐射细胞外泌体进行表征,发现了一种新型肿瘤抗原,并证明了外泌体在辐射诱导的抗肿瘤免疫中的作用,阐明了放射治疗激活抗肿瘤免疫的机制。

文章标题:Radiation-induced small extracellular vesicles as“carriages” promote tumor antigen release and triggerantitumor immunity
发表期刊:Theranostics
影响因子:IF=8.579
实验策略:LFQ蛋白质组学




技术路线





结果速递

辐射前后外泌体蛋白组学共鉴定到146种差异表达的蛋白质,包括117种上调蛋白质和29种下调蛋白质(FC>1.5p<0.05)(如图1A,KEGG通路分析显示差异表达的蛋白质在白细胞跨内皮迁移信号通路中富集(如图1B)。其中CDCP1是一种跨膜蛋白,在包括肺、肾和结肠肿瘤在内的多种肿瘤中过度表达,CDCP1表达与癌症分期相关。此外,蛋白质印迹证实在辐射后 4T1 细胞 sEVsCDCP1 表达上调。

1.LFQ蛋白组学差异筛选与通路富集


研究人员采用人工合成的 CDCP1肽验证了CDCP1免疫作用(图2)。通过肽刺激的活性 CD8+-IFNγ+ T 淋巴细胞的增加证实了引发的免疫。将4T1 细胞皮下注射到 BALB/ cmice 的背部或尾静脉,发现CDCP1肽免疫小鼠中,4T1肿瘤的生长受到极大抑制,肿瘤体积更小,生长曲线更慢,肿瘤重量更小,肺转移中的光子通量更低。表明CDCP1 肽能够触发主动免疫,通过激活 淋巴细胞抑制 4T1 原发性和转移性肿瘤生长,CDCP1可被视为一种TAA (肿瘤相关抗原)。 

2.sEV 中上调蛋白的肽引发抗肿瘤免疫


最后,研究人员探究了辐射诱导的 sEVs 触发抗肿瘤免疫的机制。通过共培养DCCD8+ T细胞,发现 辐射sEVs 免疫通过磷酸肌醇 3-激酶 PI3K)-蛋白激酶 B (Akt) 信号增强了 CTLs 的激活。辐射可能使 sEV 富含多种 TAA 和 DAMPHsp70 和 Hsp90),并且辐射诱导的 sEV 可能通过交叉呈递途径调节抗原特异性CD4CD8T细胞活化。

3.辐射诱导的 sEVs 触发抗肿瘤免疫的机制



青莲百奥外泌体一站式组学服务

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01

外泌体分离富集

  • 超速离心法——业内金标准

  • TIO2富集方法——研发技术


02

外泌体全面鉴定(NAT/电镜/WB)

电镜图片:清晰反应电镜下外泌体的茶托状结构。


WB(Western Blot)图片:据文献统计,选择排列前三的标志蛋白进行鉴定。


NTA(Nanoparticle Tracking Analysis)纳米粒径分析:统计外泌体群体分布特征。


03

多组学联合分析

蛋白质组学+代谢组学+转录组学+生物信息分析


04

外泌体验证无忧

外泌体进入细胞验证、外泌体功能验证、通路蛋白验证。





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