分子量一般指相对分子质量，分子量是有机化合物基本的理化性质参数，分子量正确与否往往代表着所测定的有机化合物及生物分子的结构正确与否,因此也是产品报批的重要数据之一。

蛋白或多肽药物具有结构复杂且高度非均一性的特点，其开发和生产过程复杂，面临很多不可控因素，为了确保产品安全有效，必须进行全面的表征。准确的氨基酸序列、分子量、价态变化、糖基化、聚集水平以及氧化水平都是蛋白质药物表征的关键要素。例如：单克隆抗体被认为是具有高度特异性的靶向药物，其对肿瘤细胞的靶向性非常高。抗体-药物偶联物（Antibody-drug conjugates，以下简称 ADCs）技术，就是在抗体蛋白的特定氨基酸上偶联具有抗肿瘤作用的高效应化疗药物（或称小分子药物），以增加单克隆抗体的疗效、并降低小分子药物的毒性。相比单克隆抗体，ADCs 药物的生产工艺更为复杂，因此为了保证 ADCs 药物的安全性和有效性，需对 ADCs 药物的质量进行监控。药物抗体比（drug to antibody ratio，以下简称DAR）是评价 ADCs 药物的生产工艺和产品质量的一个重要参数。其中MS检测方法因其快速、灵敏度高和强大的定性功能等优点，愈来愈广泛地被用于测定 ADCs 的 DAR。

随着非变性质谱（Native MS）技术的不断发展和推广，采用非变性质谱进行cysteinelinked ADCs分析显示了强大的应用潜力。Thermo Scientific^TM Exactive^TM Plus EMR 质谱仪保持了Orbitrap 高分辨率、高质量精度的优势，分辨率高达140,000 FWHM，能够实现同分异构体的分离和糖基化状态的测定，同时扩展质量数范围至 m/z 20,000，实现了较大蛋白质、抗体、抗体-药物偶联物、糖型和蛋白质组装的分析，适用于测定蛋白和蛋白复合物在天然结构状态下的分子量。

• 仪器：Exactive Plus EMR 质谱

• 数据处理软件：ProteinDeconvolution（v4）

结果展示

表 1 送检样品分子量 LC-MS 检测结果

样本的TIC图

样本XXX的相对分子质量图

• 样品要求：蛋白纯度>95%；蛋白质量>100 μg，浓度0.5μg/μL以上。
  

利用iCIEF监视贮存过程中蛋白的电荷异质性，作为产品稳定性评估的一部分。结果显示，在3个月的存储期间（22℃），CRM197的酸性峰（pI 5.77和5.82）增加，而主峰（pI 5.9）降低

• 样品要求：蛋白纯度>90%；蛋白质量>100 μg，浓度0.5μg/μL以上。