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「青莲百奥」蛋白组学FAQ:WB的原理是什么?

2020-11-30 00:00:00

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺疑胶电泳,待检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体,例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹(blot)。用蛋白溶液(如5%BSA)处理,封闭NC膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体(一抗)处理NC膜(只有待研究的蛋白质才能与ー抗特异结合形成抗原抗体复合物),这样清洗除去未结合的一抗后,只有在目标蛋白的位置上结合着一抗。用一抗处理过的NC膜再用标记的二抗处理(二抗是指一抗的抗体),处理后,带有标记的形成抗体复合物可以指示一抗的位置,即是待研究的蛋白质的位置。

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