Western Blot采用的是聚丙烯酰胺疑胶电泳，待检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离，转移到固相载体，例如硝酸纤维素薄膜（NC）上。固相载体可以吸附蛋白质，并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹（blot）。用蛋白溶液（如5%BSA）处理，封闭NC膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体（一抗）处理NC膜（只有待研究的蛋白质才能与ー抗特异结合形成抗原抗体复合物），这样清洗除去未结合的一抗后，只有在目标蛋白的位置上结合着一抗。用一抗处理过的NC膜再用标记的二抗处理（二抗是指一抗的抗体），处理后，带有标记的形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。

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