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「青莲百奥客户文章」外泌体高分文章,青莲百奥用“实例”说话

2020-10-23 00:00:00
「青莲百奥客户文章」外泌体高分文章,青莲百奥用“实例”说话
详细介绍:

又一篇高分文章在青莲百奥的协助下成功发表啦,你还不心动吗?一起来看看吧!

肝纤维化是多种慢性肝病发病机制的重要结构基础,包括病毒性肝炎、酒精性和胆汁淤积性肝病。大自噬受损/自噬参与肝纤维化的发病机制,然而,异常的自噬如何促进纤维化还远未被了解。近年来,虽然对肝纤维化发病机制的认识有了很大的进展,但寻找有效的抗肝纤维化药物,仍然是药物开发中一个不可征服的领域。

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来自中国医学科学院药物研究所胡卓伟教授课题组在Autophagy杂志(IF 11.059)发表了以“Disrupting the TRIB3-SQSTM1 interaction reduces liver fibrosis by restoring autophagy and suppressing exosome-mediated HSC activation”为题的研究性文章,揭示了在肝纤维化发生中TRIB3与SQSTM1相互作用介导的自噬受阻机制,并发现Pep2-A2(SQSTM1的UBA结构域生成的与一种细胞穿透肽连接)可降低肝脏纤维化组织中TRIB3与SQSTM1的相互作用,是治疗纤维增生性肝病的一种可能的治疗策略。文章所用的人纤维化肝组织材料均取自接受开放手术修复的肝硬化患者。

青莲百奥完成了文章中TRIB3过表达肝细胞分泌的外泌体与对照组肝细胞分泌的外泌体中差异表达蛋白鉴定工作(鉴定到175个蛋白在表达上没有变化或表现出低信号强度,16个蛋白下调,9个蛋白上调)。

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大自噬/自噬是一种细胞自消化过程,在营养缺乏和各种细胞应激状态下维持细胞和组织稳态的重要过程。当自噬降解受到损害时,外泌体分泌是常见的替代途径。

之前的研究表明TRIB3 (毛球族假激酶3)是一种应激蛋白,在多种应激源作用下上调,直接与受体SQSTM1 /p62相互作用,干扰其与MAP1LC3/LC3和泛素化底物蛋白的结合,抑制自噬通量,保护多种肿瘤促进因子免受癌细胞的自噬降解。阻断TRIB3-SQSTM1的相互作用,通过恢复肝细胞和肝干细胞的自噬通量,对肝纤维化具有强大的保护作用。

在本研究中,作者检测了人的正常肝组织和纤维化肝组织中TRIB3和自噬相关的蛋白的表达水平,发现纤维化肝组织中TRIB3的表达高于正常肝组织;纤维化组织中BECN1/Beclin 1 、PIK3C3(磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基型3)、SQSTM1表达、LC3-II与LC3-I的比值、不溶性SQSTM1聚集体比正常肝组织增加,得出纤维化组织中自噬通量异常。

继而研究发现,沉默TRIB3不仅可以抑制LC3-II:LC3-I、BECN1和PIK3C3的水平,还可以在不影响可溶性SQSTM1水平的情况下降低不溶性SQSTM1在TAA处理的肝脏中的聚集。为了证明TRIB3在抑制自噬通量中的作用,用表达腺病毒的RFP-GFP-LC3感染肝细胞,检测自噬通量。采用活细胞成像,检测到RFP-GFP-LC3为红色斑点,而TRIB3过表达增加了黄色斑点的存在和动态移动的黄色斑点,表明过表达TRIB3可使得细胞自噬抑制。

由于自噬通量对晚期核内体降解至关重要,事实上,SQSTM1和晚期核内体标记的CD63在过表达的TRIB3肝细胞中均表现出明显的聚集。作者对CD63和溶酶体标记物LAMP1(溶酶体相关膜蛋白)进行了免疫染色,CQ处理或TRIB3过表达的肝细胞中更地定义细胞器的变化。24小时后,观察到CD63和LAMP1在肝细胞中的共域化增强,而无论是CQ处理还是TRIB3过表达都显著降低了这种共域化,表明高TRIB3表达抑制了晚期内胚体与溶酶体的融合。鉴于自噬功能障碍是外泌体释放的关键启动因子,而外泌体释放是减轻细胞压力的另一种途径,作者又验证得到了TRIB3介导的自噬通量阻塞可促进肝细胞外泌体分泌增加。
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在TRIB3过表达肝细胞培养上清液中发现,HSC(造血干细胞)迁移、增殖、形态学改变和异位表达增加,且TRIB3过表达的肝细胞分泌的外泌体与对照组肝细胞来源的外泌体相比,鉴定到175个蛋白在表达上没有变化或表现出低信号强度,16个蛋白下调,9个蛋白上调。可以得到,过表达TRIB3肝细胞分泌的外泌体诱导了HSC活化。


由于TRIB3-SQSTM1的相互作用在纤维化肝组织中起着关键作用,作者推测融合肽Pep2-A2可能对肝纤维化有治疗作用,它是从SQSTM1的UBA结构域生成的,与一种细胞穿透肽(Pep2, hlyvspwgg)连接。通过TRIB3在纤维化肝组织中的表达及其在BDL 或TAA诱导的肝纤维化小鼠模型中的作用(肝细胞培养体外实验和小鼠的体内实验),之后得到验证,得出了Pep2-A2可降低了肝脏纤维化组织中TRIB3与SQSTM1的相互作用。靶向TRIB3与SQSTM1的相互作用是治疗纤维增生性肝病的一种可能的治疗策略。

读完这本篇文章后是否帮助你开启了新的研究思路呢?希望关注外泌体的小伙伴儿在实验中遇到任何问题都可以直接联络我们,大家可以持续关注青莲百奥的官网,我们一直在线~O(∩_∩)O~

参考文献: 

Zhang Xiao-Wei,Zhou Ji-Chao,Peng Dian,Hua Fang,Li Ke,Yu Jiao-Jiao,Lv Xiao-Xi,Cui Bing,Liu Shan-Shan,Yu Jin-Mei,Wang Feng,Jin Cai-Cai,Yang Zhao-Na,Zhao Chen-Xi,Hou Xue-Ying,Huang Bo,Hu Zhuo-Wei. Disrupting the TRIB3-SQSTM1 interaction reduces liver fibrosis by restoring autophagy and suppressing exosome-mediated HSC activation.[J]. Autophagy,2019.


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